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酶活檢測試劑盒基于高度水溶性的四唑鹽進(jìn)行測定

發(fā)布時間: 2022-05-30  點擊次數(shù): 2024次
  酶活檢測試劑盒測定過程中所需要的儀器和試劑:可見分光光度計、1mL玻璃比色皿(光徑10mm)、研缽/勻漿器、可調(diào)式移液器、臺式離心機、恒溫水?。囵B(yǎng)箱和蒸餾水。
 
  基于高度水溶性的四唑鹽進(jìn)行測定。WST-8在電子介體的作用下可還原生成水溶性甲瓚產(chǎn)物,產(chǎn)生顏色反應(yīng)。WST-8被細(xì)胞中的脫氫酶還原而生成橙色產(chǎn)物(甲瓚),可溶于組織培養(yǎng)基中。細(xì)胞中脫氫酶產(chǎn)生的甲瓚產(chǎn)物的量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比。CCK-8法應(yīng)用非常廣泛,如藥物篩選、細(xì)胞增殖測定、細(xì)胞毒性測定、腫瘤藥敏試驗以及生物因子的活性檢測等。
 
  細(xì)胞活性是判斷體外培養(yǎng)細(xì)胞在某些條件下是否能正常生長的重要指標(biāo),如藥物處理、放射性或紫外線照射、培養(yǎng)條件變化等。細(xì)胞活性檢測方法有很多種,如臺盼藍(lán)染色法、克?。洌┬纬煞ā?、ATP含量測定法、熒光染色法、比色法(MTT法)等。
 
  一些熒光染料對死細(xì)胞和活細(xì)胞有不同的作用效果,利用熒光顯微鏡檢測細(xì)胞活性。如碘化丙錠(PI),被活細(xì)胞排斥但能穿透正在死亡或已經(jīng)死亡細(xì)胞的細(xì)胞膜,因此活細(xì)胞不被染料染上色,只有死細(xì)胞或是凋亡細(xì)胞才能染上紅色。
 
  吖啶橙(AO)能透過質(zhì)膜完整的細(xì)胞,嵌入細(xì)胞DNA,使之發(fā)出明亮的綠色熒光。溴化乙錠(EB)僅能透過胞膜受損的細(xì)胞,嵌入DNA,發(fā)橘紅色光。也可應(yīng)用AO-EB雙染法鑒定細(xì)胞活性。這種檢測方法相比傳統(tǒng)的染料,具有靈敏度高,操作簡便,結(jié)果容易分辨等特點,而且利用雙染法還可以分辨活細(xì)胞、凋亡早期細(xì)胞、凋亡晚期細(xì)胞、死亡細(xì)胞。在細(xì)胞凋亡的檢測上有很廣泛的應(yīng)用。
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